Haluat:
- määrittää sekvenssin tunnistaaksesi mutaatioita (piste-mutaatiot (SNP:t), insertiot, deleetiot)
- arvioida sukulaisuussuhteita yksilöiden tai populaatioiden välillä
- tuoda esiin tietyn organismityypin läsnäolo biologisessa näytteessä
- toteuttaa kloonaus ilmaisuvälineessä rekombinanttiproteiinin synteesiä varten...
Nämä analyysit vaativat yleensä geneettisen materiaalin amplifikaatiota entsymaattisen reaktion, jota kutsutaan PCR:ksi (Polymeraasiketjureaktio), avulla. Tämä reaktio suoritetaan yleensä DNA:sta. Joissakin erityisissä sovelluksissa käytetään lähtömateriaalina käänteistranskriptoitua RNA:ta (ADNc).
Menetelmän periaate
DNA-molekyylit luonnollisessa tilassaan koostuvat kahdesta toisiaan täydentävästä juosteesta. Lämpötilan nouseminen yli 94 °C aiheuttaa DNA:n kahden juosteen erottumisen ja sekundaaristen rakenteiden tuhoutumisen (denaturointivaihe).